Práctica No. 1

Reconocimiento y uso del material más utilizado en microbiología.

OBJETO DE APRENDIZAJE:

Conocer los métodos microbiológicos y conocer sus principios fundamentales.

COMPETENCIA:

·         Aplicar los métodos y principios fundamentales de seguridad y uso de equipos de laboratorio de microbiología.

·         Identificar los equipos de laboratorio más utilizados para el estudio microbiológico.

·         Identificar los instrumentos más utilizados para el estudio microbiológico.

MATERIAL MÁS UTILIZADO EN MICROBIOLOGÍA

Mesas de laboratorio y fregadero

Mechero Bunsen

Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10-15cm de la llama del mechero (zona aséptica).En caso de utilizar mechero nunca se debe coger material por encima de la llama

Antes de comenzar a trabajar se procurará disponer de todo el material necesario para el procesamiento de la muestra

Tomar las medidas necesarias para evitar la contaminación de las muestras o/ y cultivo por microorganismos ambientales

Estufa de incubación

Es una cámara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos.

Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura óptima de crecimiento (generalmente 35-37º).

 Frigorífico o cámaras refrigeradas

Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como microorganismos. Generalmente están a una temperatura fija de 4ºC.

Congeladores

Se utilizan para la conservación de reactivos y microorganismos a temperaturas inferiores a 0ºC, llegando a -80ºC (los más frecuentes son -20º, -40º y -80º).

Microscopio óptico

 Centrífuga

Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrífuga lo que permite la separación de los distintos componentes de la muestra mediante la precipitación en el fondo del tubo de las partículas en suspensión.

 Balanzas

.Jarras de anaerobios:

Recipientes que se usan para conseguir una atmósfera libre de oxígeno para el cultivo de microorganismos anaerobios.

 Asas de siembra:

Se utilizan para sembrar. Pueden ser metálicas o de plástico, curvas o rectas (para la siembra por picadura).

·         Placas de Petri: recipientes para la preparación de medios de cultivo sólidos

·         Placas de Petri con medio sólido

·         Tubos con medio líquido

·         Tubos con medio sólido

·         Pipetas de vidrio, de plástico y pipeteadores.

·         Pipetas

Área de esterilización

Procedimiento por el que se consigue la muerte de todos los organismos vivos y  formas de resistencia en un objeto o producto tratado.

Autoclave

Es el equipo más utilizado. Es un procedimiento de esterilización mediante calor húmedo. Se realiza en al autoclave durante 15 ó 20 min, según el volumen, a 115°C ó 121°C, según la naturaleza del material que se desee esterilizar.

Autoclavado: es un procedimiento en el que se emplea vapor a presión (a 1 atmósfera). Como tiene gran poder de penetración la temperatura y los tiempos utilizados son menores que los que se emplean con el horno Pasteur (121º C, 15-20 minutos).

Horno de Pasteur: emplea altas temperaturas (160-180º C) durante un tiempo prolongado (1.5 a 3 horas). Debido a su poca capacidad de penetración se usa para esterilizar vidrio y metales. Actúa principalmente desnaturalizando las proteínas y secundariamente oxidando los compuestos celulares.

Lunes 8 de septiembre del 2014

Práctica No.2

Colorantes, mordientes e indicadores

Preparación de soluciones y colorantes que se utilizan en el análisis físico, químico microbiológico.

(Preparará la tinción de Gram. Tinción Giemsa, azul de metileno etc.

OBJETO DE APRENDIZAJE: Preparar soluciones

COMPETENCIA:

·         Preparar un colorante ( tinción de Gram)

·         Preparar un indicador (fenolftaleína)

·         Preparar soluciones limpiadoras.

TINCIONES DIFERENCIALES

Las tinciones diferenciales son aquellas tinciones que se usan para diferenciar de manera mas explicita los microorganismos. Estas tinciones utilizan los colorantes diferenciales, que se componen de más de una sustancia tintórea. En algunas técnicas de coloración, las tinciones diferenciales más importantes que se emplean en bacteriología son las de Gram y la tinción ácido-resistente. Ambas tinciones se utilizan para obtener información acerca de la composición de las capas de la pared celular de las células bacterianas

TINCION DE GRAM

La tinción de gram o coloración de gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose gram positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y bacteria gram negativa a las que se visualizan de color rosa

Bacterias Gram positivas

En microbiología, se denominan bacterias Gram positivas a aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram: de aquí el nombre de "Gram-positivas" o también "grampositivas". Esta característica está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, y cuando se tratan como taxón se utiliza también el nombre de Posibacteria.

Bacterias Gram negativas                         

Las Bacterias Gram-Negativas son aquellas que presentan dos membranas lipídicas y entre ellas se localiza un fina pared celular compuesta fundamentalmente por peptidoglucano ( al ser fina esta pared, no se tiñe de violeta o azul en la tinción ).Estas bacterias se tiñen. de Rosa

TINCION DE ZIEHL NEELSEN

La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, para la identificación de microorganismos patógenos, por ejemplo M. tuberculosis.

Fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un bacteriólogo y Friedrich Neelsen (1854 -1894), un patólogo.

Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias. Contienen ácidos grasos (ácidos micólicos) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistente. Las mico bacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl Neelsenrequiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared ba cteriana que contiene ceras.

ACTIVIDAD

1.    Descarga este video y observa detenidamente, súbelo a tu blog en forma visible, y realiza en ese mismo lugar las instrucciones 2.

https://www.dropbox.com/s/z2p9j3u3ob7h7o0/MORFOLOG%C3%8DA%20DE%20COLONIAS%20BACTERIANAS.wmv?dl=0

2. Interpretar la morfología individual de cada característica presentada.

FORMAS:

§  Circular: Forma de un circulo.

§  Irregular: No tienen forma definida.

§  Rizoide: Pequeños rizos como con complexión de algodón.

§  Filamentosa: Su morfología es curiosa sus orillas terminan puntiagudamente.

§  Roseta: Tienen como forma de hongo.

BORDES:

§  Entero: Grueso, con ampliación alrededor.

§  Dentado: Brilloso y muy grueso.

§  Filamentoso: Pequeños chuzos puntiagudos en forma de agujas.

§  Digitalizado: Pequeños de destellos de luz.

§  Lacerado: Complexión algodonosa.

§  Rizoide: Pequeños pelitos en forma rizada.

TEXTURA:

§  Lisa: Que no tiene ninguna deformación

§  Escamosa: Como si fuera la piel de un pez.

§  Rugosa: Arrugada, como si fuera una verruga.

§  Plegada: Como si fueran los tentáculos de un pulpo.

§  Granular: Como si estuviera conformada de granitos diminutos.

Cromogénesis:

§  Amarillo

§  Fucsia

§  Rojo

§  Bruna

§  Blanca

3. Describe a cada colonia:

Ejemplo: Colonia irregular, elevada y convexa, rugosa, amarilla, traslucida.

ü  Colonia Circular, con elevación convexa, lisa, traslucida.

ü  Es una colonia irregular, traslucida, dentado.

ü  Colonia filamentosa, sin elevación, escamosa, bruna.

ü  Colonia en roseta, elevación plana, plegada, blanca,  traslucida.

ü  Colonia filamentosa, elevación umbilicada, lisa, blanca.

ü  Colonia rizoide, elevación plana, poco rugosa, blanca.

ü  Colonia roseta, elevación crateriforme, plegada, blanca, opaca.

4. Contestas las siguientes preguntas:

¿Qué es un cultivo puro y un cultivo mixto?

Un cultivo puro es aquel que contiene un solo tipo de microorganismo. EL modo de obtener estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que proviene de una sola célula.

Un cultivo mixto cuando dos o más especies de microorganismos, se desarrollan en su conjunto en un solo medio.

Lunes 8 de septiembre del 2014

Práctica No. 3

Técnicas de desinfección y esterilización de materiales y medios de cultivo

OBJETO DE APRENDIZAJE

Aplicar los métodos de esterilización.

COMPETENCIA:

·         Conocer los principios generales de las técnicas de la esterilización de materiales de vidrio.

·         Identificar las partes de la estufa, autoclave u olla de presión y su funcionamiento.

·         Aplicar el método de esterilización por vía seca.

·         Aplicar el método de esterilización por vía húmeda.

·         Identificar medios de cultivo , clasificación y sus características

·         Reconocer la importancia de la esterilización en medios de cultivo

DESINFECCIÓN

Proceso físico o químico que mata o inactiva agentes patógenos tales como bacterias, virus y protozoos impidiendo el crecimiento de microorganismos patógenos en fase vegetativa que se encuentren en objetos inertes.

LIMPIEZA: Es la remoción de todos los materiales extraños (detritus, sangre, proteínas, etc.) que se adhieren a los diferentes objetos. Se realiza con agua, detergentes y productos enzimáticos. Este proceso puede reducir en 3-4 logaritmos la contaminación microbiana inicial y es el paso previo a cualquier proceso de desinfección y/o esterilización. Si el instrumental no está limpio los procesos de desinfección y esterilización no serán totalmente eficaces, ya que la suciedad no permitirá el contacto del agente con la superficie y actuará protegiendo a las bacterias

CONTAMINACIÓN:

Pérdida de la pureza o calidad por contacto o mezcla así como  por la introducción de  microorganismos en una herida o deposito de material radiactivo  en cualquier parte donde no sea adecuado en especial donde su presencia  puede ser nociva.

ASEPSIA: Método para prevenir infecciones por la destrucción de agentes patógenos, en especial por métodos físico

PRINCIPIOS DE ASEPSIA:

• Del centro a la periferia
• De arriba hacia abajo
• De la cabeza a la piecera
• De lo distal a lo proximal
• De lo limpio a lo sucio
• De adentro hacia fuera

ANTISÉPTICO: Agente que controla y reduce la presencia de microorganismos potencialmente patógenos que se encuentran sobre piel y/o mucosas (sólo pueden aplicarse externamente sobre seres vivos).

DESCONTAMINACIÓN:

Proceso para lograr que una persona, objeto o entorno, esté libre de microorganismos, radioactividad u otros contaminantes.

ESTERILIZACIÓN:

Es la destrucción o eliminación total de microorganismos, incluyendo las esporas, de las superficies de objetos inanimados.

Esterilización por vía seca (calor seco)

El calor seco produce desecación de la célula, es esto tóxico por niveles elevados de electrolitos, fusión de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que están en contacto con éstos.

La acción destructiva del calor sobre proteínas y lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la actividad de agua del medio es baja.

Estufas presentan doble cámara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cámaras, a temperatura de 170º C para el instrumental metálico y a 140º C para el contenido de los tambores. Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal, que al dilatarse por el calor, cortan el circuito eléctrico.

Ventajas del calor seco:

·         No es corrosivo para metales e instrumentos.

·         Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles.

Desventajas:

·       Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la baja penetración del calor.

Esterilización por vía Húmeda.

El efecto que causa este calor es matar al microorganismo por la coagulación de sus proteínas cuando se encuentran en una zona atmósfera húmeda y sometidos a altas temperaturas, además, es mucho más rápido y efectivo en su acción.

La acción letal del vapor proviene del calor latente liberado cuando se condensa en una superficie fría aumentando de esta manera la temperatura de la zona enfriada. La destrucción de las esporas bacterianas sigue un comportamiento de forma similar en tanto que el vapor se condensa en la pared de la espora y aumenta su contenido en agua que finalmente hidroliza y degrada el contenido proteico.

Este calor se aplica en forma de vapor de agua y a temperaturas mayores o menores de 100ºC combinadas con un aumento de la presión en algunos casos.

ACTIVIDADES PRELIMINARES ANTES DE LA PRÁCTICA 4

Lunes 11 de septiembre del 2014

Antibiograma

Prueba microbiológica que se realiza para determinar la sensibilidad de cierta colonia bacteriana a uno o varios antibióticos. Dependiendo del origen o localización de la infección en el paciente, se determina qué tipo de antibiótico se utilizará en el antibiograma, el cual se debe realizar siempre que una toma bacteriológica de finalidad diagnóstica

Ante diversas infecciones no siempre es posible predecir la susceptibilidad de las bacterias a los antimicrobianos; por ello, se considera necesario el estudio de la sensibilidad de los gérmenes a dichos medicamentos. 

En una caja de Petri (recipiente redondo de cristal o plástico provisto de cubierta con la misma forma) se coloca la colonia de bacterias por toda su superficie para que se desarrolle en forma homogénea. Posteriormente, se agregan pequeñas cápsulas que contienen antibiótico, las cuales están provistas de letras que indican el nombre del medicamento y números que señalan su concentración.

Las placas se incuban durante aproximadamente 48 horas (el tiempo puede variar dependiendo de la especie de bacteria a estudiar), a 37º C (Celsius o centígrados) y en posición INVERTIDA. Transcurrido este tiempo se observa el cultivo: los microorganismos habrán crecido por toda la superficie, excepto en las zonas impregnadas con el antibiótico al que son sensibles.

¿ Qué son los antibióticos?

Se denomina Antibiótico (del griego, anti, 'contra'; bios, 'vida'), a cualquier compuesto químico utilizado para eliminar o inhibir el crecimiento de organismos infecciosos. Una propiedad común a todos los antibióticos es la toxicidad selectiva: la toxicidad hacia los organismos invasores es superior a la toxicidad frente a los animales o seres humanos. 

¿Qué efectos presentan los antibióticos en nuestro cuerpo?

Los antibióticos, dependiendo de su clase tienen diversos mecanismos de acción, por ejemplo, las cefalosporinas actúan destruyendo la pared celular, las fluoroquinolonas como el cipro, actúan destruyendo el código genético de la bacteria, sus efectos sobre el organismo ,son muchos y variados

que es la hipersensibilidad

La hipersensibilidad es una sensibilidad excesiva o una respuesta exagerada a la reacción Ag-Ac. En estos casos la respuesta inmune tiene efectos nocivos, puede originar daños más o menos graves. Esta reacción también se conoce como alergia

Hay dos tipos de hipersensibilidad:

  Hipersensibilidad inmediata: es la reacción alérgica que se presenta a los pocos minutos de la inyección del antígeno. Ejemplo: las ortigas

  Hipersensibilidad retardada: aparece pasado un tiempo, horas o días después del ataque del antígeno. Ejemplo: rechazo a un órgano transplantado

REGIMENES DE DOSIFICACION 

Para que un fármaco pueda ejercer una acción terapéutica, tiene que alcanzar en el sitio de acción una concentración efectiva y ésta debe mantenerse constante durante un tiempo adecuado, de modo que permita una terapia continua.

 el nivel sanguíneo no puede mantenerse constante debido a que, apenas ingresado al organismo, el fármaco comienza a ser eliminado por diferentes mecanismos de tal suerte que la concentración alcanzada inicialmente desciende a niveles subclínicos con una velocidad que es característica para cada fármaco. El sistema de administración ideal lo constituye, sin duda, la infusión intravenosa continua, en la cual el medicamento se administra de manera que el paciente recibe exactamente la cantidad que necesita para mantener el nivel sanguíneo requerido y obtener la respuesta deseada.

Todos los modelos o diseños de dosificación tratan de ceñirse a este principio, con el fin de administrar una dosis que eleve rápidamente el nivel plasmático del fármaco y, en seguida, mantenerlo sin fluctuaciones demasiado considerables como para provocar síntomas tóxicos o indeseables o que las fluctuaciones desciendan por debajo de los niveles terapéuticos. Existe, por lo tanto, una concentración apropiada del fármaco en los fluidos del organismo, la cual puede fluctuar dentro de márgenes estrechos dé un individuo a otro. Ésta concentración se denomina "concentración efectiva mínima"(CEM) y es una característica propia de cada fármaco.

Martes 16 de septiembre del 2014

Exposición del CALDO UREA

https://www.dropbox.com/s/rdcm3cu7jpejsvh/caldo%20de%20urea%20%281%29.pptx?dl=0

            Lunes 22 de septiembre del 2014

Introducción a técnicas de microbiología

Condiciones de asepsia

·         Lavado de manos

·         Limpieza de la mesa de trabajo (forrarla con papel estraza)

·         Flamear el asa en posición perpendicular

·         Después de retirar es asa flamear las bocas de tubos, matraces y frascos

·         Marcar o etiquetar el tubo inoculado

NOTA:

Cuando se inicie y termine se tiene que esterilizar el asa, inocular la bacteria en un medio limpio, sin contaminar, tomando con una mano el tubo y con la otra el asa.